En la mansión de Luigi 3 de Nintendo, Luigi se embarca en unas vacaciones de ensueño con Mario y sus amigos al recibir una invitación a un lujoso hotel. Sin embargo, su sueño se convierte rápidamente en una pesadilla cuando King Boo revela que todo había sido una estratagema para capturar a Mario y sus amigos. Con la ayuda del profesor E. Gadd una vez más, el héroe reacio y cobarde Luigi recorre los traicioneros pisos del hotel ahora ominoso en una búsqueda para salvarlos.